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1.       推測光合作用可能是先製造某一物質，然後再合成醣類：1949年，美國生化學家班森（Benson）將植物先照光後，再移入暗室，結果發現仍能吸收CO₂進行光合作用，表示光合作用是先製造某一物質，然後利用此一物質再進行其餘反應。

1.    確定光合作用不只和光有關，也受溫度影響：1905年，布雷克曼（F. F. Blackman）將溫度固定，逐漸提高光度，則光合作用速率會上升至一個極限，此時若再提高溫度，則光合作用速率又會上升至一個極限。他表示光合作用有些與光有關，有些則受酵素控制，因為酵素作用受溫度影響。
 2.  確定光合作用釋放的氧氣來自水：　　1930年，美國生物學家范尼爾（C. B. Van Neil）發現紫細菌仍然能利用H2S行光合作用，以固定CO²。但是放出的卻是硫，而不是O²，故他推測光合作用釋放的O²來自水。

1.推斷光合作用與光有關：1874年，德國外科醫生梅爾（J. Mayer, 1814～1878）正確推斷燃燒植物所放出的能量，或耗用於植物及動物體內新陳代謝的能量，都來自光合作用所固定的光能。
2.

   1.1782年，瑞士科學家稍索爾（N. de Saussure, 1767～1845）將植物放入玻璃容器內，發現容器內的O₂會增加，而CO₂則會減少，於是他認為植物和動物恰好相反，植物是吸CO₂而放出氧氣的，也就是說植物的生長是取決於CO₂的量，由於植物會吸取CO₂，因此才有淨化空氣的作用。

  
植物會製造養素：1772年，英國化學家普利斯力（J. Priestley, 1733～1804）發現在沒有放置植物的密閉玻璃鐘罩內的老鼠，沒多久就顯得病懨懨；但是有植物相伴的就顯得較為健康活潑，因此他認為動物會破壞空氣中的「養素」，植物則有恢復養素的作用。（註：那時人們普遍認為空氣中含有供養生命的神秘物質，叫做養素。）
英根皓斯的實驗

西元1727年，英國牧師兼自然學家哈勒斯（S. Halles）做了如圖的實驗，數天後實驗組的水面上升，而控制組則否，顯示植物生長時會消耗空氣。但究竟消耗空氣中的何種成分，不得而知。
 哈勒斯的實驗（注意液面高度的變化）